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马铃薯茎尖脱毒

发布日期:2018-03-21 10:12:02  点击量:

       马铃薯茎尖脱毒是马铃薯生产重要源头,也是质量关的重中之重;因此马铃薯茎尖脱毒也是把控的重要部分。

       一、脱毒材料选取
       1、马铃薯脱毒材料的选取
       田间选择在现蕾到开花期选择生长势强,具备原品种典型性状的健康植株做好标记。生育后期到收获期,在已做标记的植株中进行薯块复选。选择性状符合原品种特征的幼龄薯,拿回实验室催芽作为脱毒材料。
       2、催芽处理
       块茎可通过自然方法出芽或通过人工方法打破休眠。自然出芽的情况下,块茎长出2~3cm的新芽;人工打破休眠催芽的情况下,可采用0.1%多菌灵溶液浸泡30min或用1%硫脲+5mg/L赤霉素的溶液浸泡5min,置于25℃黑暗条件下催芽。
       二、茎尖培养
     (1)茎尖培养基制备
      1、茎尖培养基配方
①MS+IAA1~3mg/L+6-BA1~3mg/L
②MS+NAA1~3mg/L+6-BA1~3mg/L+GA31~3mg/L
       2、MS培养基
       3、将制备好的培养基快速分装于容器内,用封口膜封口,121℃高压灭菌20min,冷却后在无菌贮存室放置3~5d,无污染的培养基放到超净工作台备用。
     (2)茎尖剥离
       1、材料消毒
       取经催芽处理或自然出芽的块茎的顶芽、2~3cm的侧芽,用自来水冲洗30min后,移入接种室进行严格消毒。先用75%乙醇浸泡30s,再用0.1%的氯化汞溶液浸泡5~10min,然后用无菌水冲洗4~5次。
       2、茎尖剥离与接种
       接种在超净工作台上操作。剥去外叶,借助40倍双目解剖镜,剥离茎尖直至露出半圆形光滑生长点,用解剖针或刀从0.1~0.3mm处切,带1~2个叶原基。迅速接种于盛有茎尖培养基的容器中,进行离体培养。用酒精灯灼烧容器口并封口,在容器上注明编号、品种名称,接种日期。待看到明显伸长得小茎、叶原基形成可见的小叶时,转移到盛有MS培养基的容器内培养,培养成4~5个叶片的试管苗。
       3、培养条件
       试管苗在温度20~25℃、相对湿度70%、光照强度2000~3000Lx条件下培养,光照时数16h/d。
       4、病毒检测
① 将试管苗按瓶上的编号,在超净工作台内将植株的上部1/3~1/2茎段转入新的培养基瓶中,编号不变。
② 同时将植株下部1/3~1/2茎段称取0.2g装入病毒检测的样品袋中。取样时样品不能粘有培养基。
③ 检测方法用ELISA(双抗体夹心法),筛选出不含PVX、PVY、PVS、PLRV、 PVM、PVA病毒的脱毒苗。
       三、试种观察
       经检测不带病毒的试管苗进行试种观察。将每个试管苗取出部分移栽到防虫网棚,结出的小薯种植到田间试种观察,检验其是否发生变异,符合原品种的典型性状的脱毒苗即为核心苗。马铃薯茎尖脱毒是马铃薯生产重要源头,也是质量关的重中之重;因此马铃薯茎尖脱毒也是把控的重要部分。
       一、脱毒材料选取
       1、马铃薯脱毒材料的选取
       田间选择在现蕾到开花期选择生长势强,具备原品种典型性状的健康植株做好标记。生育后期到收获期,在已做标记的植株中进行薯块复选。选择性状符合原品种特征的幼龄薯,拿回实验室催芽作为脱毒材料。
       2、催芽处理
       块茎可通过自然方法出芽或通过人工方法打破休眠。自然出芽的情况下,块茎长出2~3cm的新芽;人工打破休眠催芽的情况下,可采用0.1%多菌灵溶液浸泡30min或用1%硫脲+5mg/L赤霉素的溶液浸泡5min,置于25℃黑暗条件下催芽。
       二、茎尖培养
     (1)茎尖培养基制备
       1、茎尖培养基配方
①MS+IAA1~3mg/L+6-BA1~3mg/L
②MS+NAA1~3mg/L+6-BA1~3mg/L+GA31~3mg/L
       2、MS培养基
       3、将制备好的培养基快速分装于容器内,用封口膜封口,121℃高压灭菌20min,冷却后在无菌贮存室放置3~5d,无污染的培养基放到超净工作台备用。
       (2)茎尖剥离
       1、材料消毒
       取经催芽处理或自然出芽的块茎的顶芽、2~3cm的侧芽,用自来水冲洗30min后,移入接种室进行严格消毒。先用75%乙醇浸泡30s,再用0.1%的氯化汞溶液浸泡5~10min,然后用无菌水冲洗4~5次。
       2、茎尖剥离与接种
       接种在超净工作台上操作。剥去外叶,借助40倍双目解剖镜,剥离茎尖直至露出半圆形光滑生长点,用解剖针或刀从0.1~0.3mm处切,带1~2个叶原基。迅速接种于盛有茎尖培养基的容器中,进行离体培养。用酒精灯灼烧容器口并封口,在容器上注明编号、品种名称,接种日期。待看到明显伸长得小茎、叶原基形成可见的小叶时,转移到盛有MS培养基的容器内培养,培养成4~5个叶片的试管苗。
       3、培养条件
       试管苗在温度20~25℃、相对湿度70%、光照强度2000~3000Lx条件下培养,光照时数16h/d。
       4、病毒检测
① 将试管苗按瓶上的编号,在超净工作台内将植株的上部1/3~1/2茎段转入新的培养基瓶中,编号不变。
② 同时将植株下部1/3~1/2茎段称取0.2g装入病毒检测的样品袋中。取样时样品不能粘有培养基。
③ 检测方法用ELISA(双抗体夹心法),筛选出不含PVX、PVY、PVS、PLRV、 PVM、PVA病毒的脱毒苗。
       三、试种观察
       经检测不带病毒的试管苗进行试种观察。将每个试管苗取出部分移栽到防虫网棚,结出的小薯种植到田间试种观察,检验其是否发生变异,符合原品种的典型性状的脱毒苗即为核心苗。马铃薯茎尖脱毒是马铃薯生产重要源头,也是质量关的重中之重;因此马铃薯茎尖脱毒也是把控的重要部分。
       一、脱毒材料选取
       1、马铃薯脱毒材料的选取
       田间选择在现蕾到开花期选择生长势强,具备原品种典型性状的健康植株做好标记。生育后期到收获期,在已做标记的植株中进行薯块复选。选择性状符合原品种特征的幼龄薯,拿回实验室催芽作为脱毒材料。
       2、催芽处理
       块茎可通过自然方法出芽或通过人工方法打破休眠。自然出芽的情况下,块茎长出2~3cm的新芽;人工打破休眠催芽的情况下,可采用0.1%多菌灵溶液浸泡30min或用1%硫脲+5mg/L赤霉素的溶液浸泡5min,置于25℃黑暗条件下催芽。
       二、茎尖培养
      (1)茎尖培养基制备
       1、茎尖培养基配方
①MS+IAA1~3mg/L+6-BA1~3mg/L
②MS+NAA1~3mg/L+6-BA1~3mg/L+GA31~3mg/L
       2、MS培养基
       3、将制备好的培养基快速分装于容器内,用封口膜封口,121℃高压灭菌20min,冷却后在无菌贮存室放置3~5d,无污染的培养基放到超净工作台备用。
      (2)茎尖剥离
       1、材料消毒
       取经催芽处理或自然出芽的块茎的顶芽、2~3cm的侧芽,用自来水冲洗30min后,移入接种室进行严格消毒。先用75%乙醇浸泡30s,再用0.1%的氯化汞溶液浸泡5~10min,然后用无菌水冲洗4~5次。
       2、茎尖剥离与接种
       接种在超净工作台上操作。剥去外叶,借助40倍双目解剖镜,剥离茎尖直至露出半圆形光滑生长点,用解剖针或刀从0.1~0.3mm处切,带1~2个叶原基。迅速接种于盛有茎尖培养基的容器中,进行离体培养。用酒精灯灼烧容器口并封口,在容器上注明编号、品种名称,接种日期。待看到明显伸长得小茎、叶原基形成可见的小叶时,转移到盛有MS培养基的容器内培养,培养成4~5个叶片的试管苗。
       3、培养条件
       试管苗在温度20~25℃、相对湿度70%、光照强度2000~3000Lx条件下培养,光照时数16h/d。
       4、病毒检测
① 将试管苗按瓶上的编号,在超净工作台内将植株的上部1/3~1/2茎段转入新的培养基瓶中,编号不变。
② 同时将植株下部1/3~1/2茎段称取0.2g装入病毒检测的样品袋中。取样时样品不能粘有培养基。
③ 检测方法用ELISA(双抗体夹心法),筛选出不含PVX、PVY、PVS、PLRV、 PVM、PVA病毒的脱毒苗。
       三、试种观察
       经检测不带病毒的试管苗进行试种观察。将每个试管苗取出部分移栽到防虫网棚,结出的小薯种植到田间试种观察,检验其是否发生变异,符合原品种的典型性状的脱毒苗即为核心苗。